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Pcr实验室现存的不足

发布时间:2020-07-06 09:17:29

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pcr核酸检测技术在新冠疫情检测中发挥了重要作用,但因为该技术对待测核酸进行了多次、大量的扩增,所以极微量的污染也容易导致结果出现假阳性。pcr实验室建设的污染,不仅会影响实验质量和结果,还对实验室工作人员的身体健康有损害。
PCR实验室设计现存的不足
▲1、PCR实验过程中易发生污染
产生污染主要有以下4个原因:
① PCR扩增产物的污染。这也是最常见的污染原因。PCR产物经反复多次的扩增,其复制量远远超过PCR的检测极限,所以即使是极微量的污染也足以造成实验结果假阳性。
② 试剂的污染。在试剂的配制过程中,接触了污染的容器、移液器、枪头、溶液等物导致试剂被污染。
③ 待测样品被污染。放置样品的容器被污染或由于容器密封不严导致样品与外界接触被污染;其次在核酸提取过程中使用了被污染的移液器或枪头导致样品被污染;另外,某些样品中含有病毒,若弥散到空气中则有可能形成交叉污染。
④ 气溶胶污染。若气溶胶中包含病毒等污染物扩散至空气中极有可能造成PCR产物污染。气溶胶是由空气与液体表面摩擦而产生的,开盖、晃动反应管及污染加样器的反复吸样都可形成气溶胶从而导致交叉污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48 000 拷贝,因此,应尤其重视由气溶胶导致污染的问题。PCR 实验室设计只要出现了污染,之前的结果报告就变为无效而且也无法进行其他的实验操作。必须找出并彻底清除污染源,才能得到准确有效的实验结果。
▲2、实验室的质量控制存在缺陷
实验室的质量控制分为:室内质量控制和室间质量控制。
室内质量控制是指实验室人员通过一定的方法和步骤,连续评价实验室工作的可靠程度,旨在监测和控制实验室常规工作的精密度,提高实验室常规工作中批内、批间样本检验的一致性,以确定测定结果是否可靠及可否发出报告的一项工作。
室间质量控制是指客观比较实验室的测定结果与靶值的差异,由外部机构采取一定的方法,连续、客观地评价实验室的结果,发现误差并校正结果,使各实验室之间的结果具有可比性。
▲3、规范管理不到位(PCR 实验室设计
为了提高实验室的检测质量,避免实验室污染以及确保实验室的生物安全,规范有效的管理是实现这一切的根本措施。但有时会出现管理不到位甚至是疏忽的地方,比如随意出入实验室,甚至逆行;没有按照规范穿戴口罩、鞋套;试验期间缓冲间两侧门同时打开;实验完毕后忘记开紫外灯消毒等。
这些不规范的行为为实验室的安全和污染埋下了隐患,从而影响检验结果的准确性。因此,有效的管理和实验室操作规程的规范执行尤为重要。
pcr实验室设计解决污染办法
已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染-使用UNG,这一技术能有效地消除由PCR产物引起的污染。另一种控制污染的方法是使用紫外线,这种方法不能完全消除污染问题,但可以将污染降低几个数量级。
 
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